探针有什么作用?
1. 检测生物分子,用于基因测序。
2. 与DNA或RNA结合,激活分子信号通路,控制细胞功能。
3. 作为抗原、配体或试剂,进行免疫分析、活性检测等。 在科研中,我们常用的单荧光基团探针有两种类型,分别是报告基因和荧光标记抗体。
下面我们来简单介绍一下这两种类型的探针及它们的用途。
一、报告基因(reporter gene) 又称为荧光报告基因(fluorescent reporter gene),它是被用于监测分子生物学过程的一个基因片段。当外源基因进入细胞后,可以将其编码的蛋白翻译成具有荧光素酶活性的酶。这种含有荧光素酶的复合物能够催化底物发光,通过检测发光的频率和强度就能够知道是否有该外源基因的存在以及该基因的表达量情况。
目前被广泛使用的报告基因大多是来自微生物,具有较高表达水平的荧光素酶基因LacZ。 当基因分析需要检测多个基因时,可以用多重荧光报告基因体系,将不同基因的相应片段插入载体中,构建融合蛋白,使其在转基因细胞中同时表达,再通过检测细胞的荧光强度来分析各基因的表观情况。
二、荧光标记抗体(Fluore scence-labeled antibody) 是一种利用基因工程技术,将抗体的Fc段或Fab段连接到荧光素酶基因上的抗体。它既保留了抗体的特异性识别能力,又获得了荧光素的荧光特性,可以通过流式细胞术进行定量分析。 荧光标记的抗体既可以单独使用也可以与同型抗体或酶标抗体共同使用,检测标本中抗原的含量。其中,直接测定蛋白质浓度的方法叫做间接竞争ELISA法;而先测总蛋白的量再计算出特定蛋白的数量的方法叫做间接ELISA法。 随着新一代测序技术的快速发展,基于测序技术的分子诊断领域已经呈现出广阔的应用前景并有着深刻的影响。